Dos métodos para escindir péptidos de resinas-en fase sólida
Un método para escindir polipéptidos de resinas en fase sólida-
Fmoc en fase sólida Después de sintetizar químicamente los péptidos, existen muchos métodos de escisión. Ahora presentaremos dos tipos básicos comúnmente utilizados por todos.
1. Método del ácido fuerte (TFA de uso común)
Coloque la resina seca en un matraz agitador y agregue la cantidad adecuada de eliminador (Scavengers), reactivo de escisión de ácido trifluoroacético (TFA), 10-25 ml/g de resina, cubra y agite intermitentemente a temperatura ambiente. Filtrar la resina con TFA nuevo. Lavar la resina 2-3 veces, combinar el filtrado y agregar gota a gota 8-10 veces el volumen de éter glacial. A veces, parte del mismo se puede eliminar con vapor de TFA. Se obtuvo un precipitado peptídico crudo. El éter dietílico se puede enfriar con hielo para mejorar la eficiencia de la precipitación. Finalmente, recoja el péptido crudo precipitado.
Resina aplicable:resina rey o resina amida Rink
2. Método del ácido débil (TFA diluido o ácido acético)
1% AGT:
Se añadió 1 g de resina colgante del polipéptido-a una solución que contenía TFA al 1%. Se selló el matraz agitador de vidrio con solución de diclorometano y se agitó durante 2 minutos. Utilice nitrógeno para verter el filtrado en otro matraz de agitación de metanol nuevo que contenga 10% de piridina. Repita la operación anterior 10 veces. Utilice 30 ml de DCM, 30 ml de MeOH. Lave los péptidos protegidos restantes en la resina tres veces secuencialmente. por TLC o HPLC Compruebe los residuos de limpieza. Combinar todo el filtrado y evaporar el disolvente a presión reducida para dejar un 5% de volumen. agregue 40 ml de agua y enfríe con hielo la mezcla para ayudar a la precipitación. Después de la filtración, lave el producto con agua limpia tres veces y colóquelo en una caja de secado al vacío para su uso. KOH o P2O5 Dejar secar.
ácido acético diluido:
use AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Trate los péptidos que cuelgan de la resina con solución de corte durante 2 horas, filtre la resina y lave la resina tres veces con solución de corte. Agregue 15 veces el volumen de n-hexano al filtrado mixto y evapore por rotación para eliminar el exceso de ácido acético. Los métodos de recuperación de péptidos se detallan a continuación.
Resina aplicable:2-Resina CTC